閱讀次數(shù)：1022 發(fā)布時(shí)間：2015/5/7 9:01:37
您知道嗎？在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中，洗滌是一大重點(diǎn)步驟。這一流程主要作用是可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。但是，不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。那么在ELISA洗滌步驟中需要怎樣正確操作呢？需要洗滌幾次？
據(jù)酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測中心技術(shù)專員介紹：ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結(jié)合(低親和力)的抗原-抗體復(fù)合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。之后，又是一輪洗滌。最后是添加底物并檢測信號。
洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強(qiáng)度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過，ELISA板的制造商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 μl。不過，有些自動化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡單，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會溢出到其他孔中。
相信在您的悉心優(yōu)化下，很快就能做出漂亮的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以上我公司對ELISA洗滌次數(shù)做出的心得點(diǎn)評，如需了解相關(guān)技術(shù)問題，歡迎您隨時(shí)聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員。
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