[導(dǎo)讀] 一般來(lái)說(shuō)，ELISA操作技術(shù)員會(huì)在一切準(zhǔn)備就緒后開始實(shí)驗(yàn)，而在實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)時(shí)卻常會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題。由于ELISA實(shí)驗(yàn)操作步驟復(fù)雜，可能一個(gè)小小的誤差就會(huì)出現(xiàn)大問(wèn)題，那么我們要如何解決并完善實(shí)驗(yàn)步驟的誤差問(wèn)題呢？今天酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心帶給您的資訊主題是：小技巧改變ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差大問(wèn)題。
①：由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過(guò)程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。
②：閾值附近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)，不能截然分為陰性、陽(yáng)性，國(guó)外廠家均要求對(duì)這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽(yáng)兩次陰最后判為陰，但實(shí)際上是否為陰不好說(shuō)，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過(guò)一段時(shí)間后再測(cè)。
③：肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的，肉眼目測(cè)結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
④：不同的ELISA試劑盒廠家產(chǎn)品其生產(chǎn)工藝和操作方法會(huì)略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
⑤：加樣時(shí)樣品量誤差，對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大，但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響極大，建議校對(duì)加樣器。
⑥：反應(yīng)時(shí)間的誤差，做大量標(biāo)本時(shí)，第一孔和最后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
⑦：由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽(yáng)性原因多為操作過(guò)程中漏加試劑等有關(guān)。
⑧：臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正�，F(xiàn)象，任何ELISA試劑盒均不可避免�？梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
⑨：若不同批號(hào)試劑的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
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[ELISA原理圖]
ELISA可以簡(jiǎn)單、高效地從瓊脂糖凝膠上純化回收DNA段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。可回收100bp–40 kb DNA段，可純化高達(dá)10μg的DNA段，回收率可達(dá)80%以上(<100bp或>10kb的DNA段回收率為30–50%)。使用ELISA試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
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