ELISA實驗是一個非常嚴謹、極其考驗操作者技巧和經(jīng)驗的實驗，檢測結果數(shù)值低、標準曲線梯度差、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問題也是兵家常事。有很多客戶向我們咨詢，ELISA實驗結果數(shù)據(jù)總是偏低，不知道是什么問題。恒遠生物就為大家總結一下具體原因，一起來看看吧！
一、整體OD值偏低或無信號：
1.試劑盒組分失活
相應對策：使用新的試劑盒，按照說明書要求保存試劑盒
2.試劑盒組分未平衡
相應對策：試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進行實驗
3.試劑混用或混合不充分
相應對策：保證使用試劑盒內完整一套試劑進行實驗，保證溶液充分混合
4.洗液被污染
相應對策：配制新的洗液
5.洗滌液浸泡時間過久或洗板次數(shù)過多
相應對策：按照說明書的要求進行操作
6.孵育時間不充分
相應對策：保證充足的孵育時間
7.孵育溫度不穩(wěn)定
相應對策：檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定
8.生物素化抗體或HRP酶結合物不足
相應對策：保證濃縮液取量準確且稀釋完全
9.生物素化抗體或酶結合物稀釋不正確或步驟顛倒
相應對策：按照說明書的步驟和要求進行操作
10. 未加終止液
相應對策：反應結束時，確保每孔加入終止液終止反應
11.終止后未及時讀板
相應對策：終止液終止反應后需要在10min內進行讀板操作
12.酶標儀設置錯誤
相應對策：在酶標儀上檢查波長和濾光片設置
二、標曲線性佳但樣本OD值偏低
1.標準品部分降解
相應對策：按照說明書推薦方式保存標準品。開封后的標準品應以最高濃度用EP管分裝凍存，保存于-20℃，半個月內使用有效。
2.標準品復溶不當
相應對策：打開前將標準品短暫離心，檢查復溶后是否有未溶解的物質
3.標準品稀釋不正確
相應對策：按照說明書要求，保證按正確倍比梯度稀釋
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原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
