實(shí)驗(yàn)原理：
系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝聚反應(yīng)的原理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定。細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品 系自大腸桿菌提取精制而成，用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)。
細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)，用于試驗(yàn)中鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及設(shè)置的各種陽(yáng)性對(duì)照。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品中每1 ng細(xì)菌內(nèi)毒素的效價(jià)應(yīng)不小于2 EU，不大于50 EU。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指靈敏度為0.03 EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在37±1℃條件下24小時(shí)不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水。
鱟試劑靈敏度定義為在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定的條件下，能測(cè)出內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品的溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用EU/ml表示。每批新的鱟試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行靈敏度復(fù)核試驗(yàn)，當(dāng)鱟試劑λc（靈敏度測(cè)定值）在0.5~2.0λ(靈敏度標(biāo)示值)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
供試品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是否有干擾，可進(jìn)行供試品干擾試驗(yàn)。若有干擾，可使用更靈敏的鱟試劑以及對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋或采用其他適合排除干擾作用的方法。
材料與儀器：細(xì)菌內(nèi)毒素、內(nèi)毒素 、鱟試劑溶液、試管、安瓿管、恒溫器。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小時(shí)，也可用其他適宜的方法，并應(yīng)確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物的污染。
二、檢查法
取裝有0.1 ml鱟試劑溶液的10 mm×75 mm試管或復(fù)溶后的0.1 ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓿5支，其中2支加入0.1 ml按最大稀釋倍數(shù)稀釋的供試品溶液作為供試品管，1支加入0.1 ml用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成的2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽(yáng)性對(duì)照管，1支加入0.1 ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對(duì)照管，1支加入0.1 ml供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液[用被測(cè)供試品溶液將同一支(瓶)細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液]作為供試品陽(yáng)性對(duì)照管。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃適宜恒溫器中，保溫60±2分鐘。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。
三、判斷結(jié)果
將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180°時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。供試品管2支均為（-），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定；如2支均為（+），應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2支中1支為（+），1支為（-），按上述方法另取4支供試品管復(fù)試，4支中1支為（+），即認(rèn)為不符合規(guī)定。陽(yáng)性對(duì)照管為（-）或供試品陽(yáng)性對(duì)照管為（-）或陰性對(duì)照管為（+），試驗(yàn)無(wú)效。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
