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產(chǎn)品展示
  • 產(chǎn)品名稱(chēng):魚(yú)己糖激酶(HK)ELISA試劑盒哪家好
  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地:美國(guó)
  • 訪問(wèn)次數(shù):1356
  • 產(chǎn)品價(jià)格:電議
  • 簡(jiǎn)介內(nèi)容:魚(yú)己糖激酶(HK)ELISA試劑盒哪家好洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干.
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魚(yú)己糖激酶(HK)ELISA試劑盒哪家好

 一.實(shí)驗(yàn)原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

二.實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制

1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。

三.樣品收集、處理及保存

1.細(xì)胞培養(yǎng)上清:

適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2)細(xì)胞:

PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過(guò)反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。

3)血清:

在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。

4)血漿:

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5)體液:

包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6.)組織標(biāo)本:

切取組織標(biāo)本,稱(chēng)取重量0.5mg,加入500ul PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

7)保存:

如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四.操作步驟

1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。

2)分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。

3)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。

注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。

4)加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。

7)加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。

8)溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙徹底拍干。

10)顯色:各孔加入顯色劑A50ul后,再加入顯色劑B50ul。

11)終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。

12)讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。

注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。

五.?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。

六.注意事項(xiàng)

1)實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

2)加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3)孵育:嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

4)建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

5)建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商聯(lián)系,如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

七.保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個(gè)月

八.訂貨說(shuō)明

1)賣(mài)方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持一致;

2)為了確保買(mǎi)方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量,對(duì)有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。

3)收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題,買(mǎi)方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣(mài)方提出書(shū)面異議。買(mǎi)方逾期不提出異議,視為貨物符合其要求,賣(mài)方不付任何責(zé)任。

4)出現(xiàn)質(zhì)量以外的問(wèn)題,如破損等,買(mǎi)方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出。買(mǎi)方未按時(shí)提出異議,視為該產(chǎn)品合格。

本公司對(duì)所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量,并提供良好的售后服務(wù),有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,請(qǐng)?jiān)谑盏截浳锏?/font>32天內(nèi)以書(shū)面形式提出,并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,我們會(huì)及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身,不涉及其他間接內(nèi)容。凡購(gòu)買(mǎi)本公司任意款elisa試劑盒,均可享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù),并提供技術(shù)指導(dǎo)。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

標(biāo)簽:魚(yú)己糖激酶 HK說(shuō)明書(shū) ELISA試劑盒多少錢(qián) 

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