在ELISA實驗檢測過程中，標(biāo)本質(zhì)量可以說是最重要的關(guān)鍵因素。如果實驗標(biāo)本質(zhì)量不過關(guān)，即使你的實驗操作技術(shù)再牛也無濟于事。今天上海恒遠就帶大家來看看在ELISA實驗中，標(biāo)本都容易出現(xiàn)哪些問題？
1．凝血不充分：此類錯誤排在第一位，主要是抗凝血中存在小凝塊，多發(fā)生在血常規(guī)檢測中，為采血后標(biāo)本沒有充分顛倒混勻所致；另外，標(biāo)本量過多，由于抗凝劑的相對不足，血漿中出現(xiàn)微血凝塊的可能性增加。微血凝塊除易阻塞檢測儀器外，由于血液內(nèi)部分成分的消耗而影響檢測結(jié)果。一份只有仔細檢查才能發(fā)現(xiàn)小凝塊的標(biāo)本，可以使血小板降低30%甚至更多，紅細胞、白細胞計數(shù)也可以降低10%左右。我們規(guī)定，對用于血常規(guī)的標(biāo)本均輕輕顛倒并仔細觀察，絕大部分可以檢查出。
2．抗凝劑與血液比例不正確：在凝血功能測定中，常有一些標(biāo)本量明顯不足，特別是兒童和入院檢查病人標(biāo)本，由于小孩采血難，入院時需檢查項目多，最易發(fā)生抽血量不足，使PT、KPTT和TT假性延長，將誤導(dǎo)臨床診治。因此，血液未到刻度的標(biāo)本一律退回重抽。
3．標(biāo)本溶血：許多指標(biāo)在紅細胞內(nèi)和血清（血漿）明顯不同，溶血可使LDH、HBDH、血K+、AST 、ALT或等值異常升高。此類錯誤是采血時的一些不良習(xí)慣造成，如：壓脈時間過長，采血不順利、抽血速度太快、血液注入容器時未取下針頭或用力過猛、等均可造成溶血。我們作過實驗，選擇20位體格檢查者，用兩種方法進行比較：⑴用注射器抽血后不去除針頭直接將針頭插入真空采血管，這時在真空管負(fù)壓作用下針管內(nèi)的血液被吸入；⑵用注射器抽血后先除去針頭，然后打開真空采血管蓋子緩緩注入標(biāo)本，兩種采血方法的標(biāo)本同時作部分生化項目檢測，結(jié)果是：前者比后者LDH上升23.4%－58.2%，平均33.7%；HBDH上升22.5%－61.4%，平均35.4%；AST上升6.7%－31.6%，平均13.7%；ALT上升4.7%－18.2%，平均11.4%；血K+上升23.7%－71.2%，平均36.1%，其它如TP、GGT和UREA等也有或多或少的變化。因此，我們主張用真空采血系統(tǒng)自然流出的標(biāo)本為宜，如果必須用注射器抽血，抽血后要取下針頭，再緩緩將血液注入標(biāo)本采集管。對于未用真空采血系統(tǒng)的單位，若注射器和針頭連接不緊，采血時有空氣進入或產(chǎn)生泡沫，使用劣質(zhì)采血器，標(biāo)本收集管沒有干燥均易造成溶血。
4．采血部位不當(dāng)：有些病人需多次檢查，或輸液時間較長，有的護士會在病人輸液更換瓶子時放出一些血液送檢，即使先去除前面的10ml血液，結(jié)果也有明顯變化。如一例輸脂肪乳后直接從輸液的靜脈中采血，導(dǎo)致了許多結(jié)果錯誤，影響前三位的是：TG為12.4mmol/L(平時為1.0 mmol/L左右)，血小板達560×109/L（上升了4倍多），總蛋白濃度從60左右上升到91.6(g/L)。其它常有明顯影響的有血糖、血電解質(zhì)等項目。雖臨床也知道正確的采血方法，但由于護理人員流動性大，工作量超負(fù)荷，不時有此類標(biāo)本送檢，只有反復(fù)與臨床溝通、宣傳，加上對標(biāo)本審核，對于血細胞比例明顯不對，結(jié)果不合理或有異常變化，及時與臨床聯(lián)系，減少不合格報告發(fā)出。
5．采血量不足：對于血培養(yǎng)而言,采血過少可降低培養(yǎng)的陽性率。有文獻報告,當(dāng)培養(yǎng)的血量從2ml增加至20ml時,血培養(yǎng)的陽性率增加30%—50%,培養(yǎng)血量每增加1ml,陽性率增加3%—5%。由于標(biāo)本已經(jīng)注入培養(yǎng)瓶，不能檢查是否符合要求，只有加強溝通交流，共同努力提高檢驗質(zhì)量。
6．標(biāo)本采集時間不當(dāng)：對細菌培養(yǎng)、激素檢查、找瘧原蟲或絲蟲病原體，需在特定的時間，以提高陽性率。
7．標(biāo)本運送和處理不及時：標(biāo)本的運送雖不屬采集范疇，但標(biāo)本采集再規(guī)范，若不能及時送檢，將嚴(yán)重影響檢驗質(zhì)量。尿常規(guī)標(biāo)本需在二小時內(nèi)檢測完成，否則細胞等有形成分開始破壞；離體過長的標(biāo)本作血細胞分析時會影響分類結(jié)果；生化檢測的標(biāo)本也因為細胞內(nèi)外物質(zhì)交換而變化。我們要求標(biāo)本及時送檢，到檢驗中心的標(biāo)本盡快測定，不能及時測定的生化、免疫等標(biāo)本及時分離血清，加蓋并置4℃冷藏。
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