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酶聯(lián)免疫(ELISA)代測服務
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應分析)是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的..
組織形態(tài)學實驗技術服務
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實驗技術服務
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作..
解決方案

Elisa試劑盒使用指南賞析

閱讀次數(shù):839    發(fā)布時間:2016/3/24 11:10:24

ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
試劑盒使用指南

步驟

常見問題

解決方案

實驗準備

加樣器不準確;尤其10ul以下的加樣器,對結果影響極大;
保溫設備不良;
洗滌用水不規(guī)范。

校正加樣器;10ul以下加樣器最好采用進口產(chǎn)品(芬蘭、法國等);
仔細校正溫度到37,水浴箱為佳;
必須使用去離子水或蒸餾水,不得用自來水、礦泉水等。
認真閱讀使用說明書。

樣品加樣

加樣不準確;
沒有混勻。

加樣時一定要仔細。加樣后,再檢查,以防漏加、錯加。
加樣后,反復抽吸3次混勻,防止血清聚集孔底,導致非特異性吸附。

洗滌

洗滌不徹底

每次注水洗滌,應靜止30秒鐘;
選用吸水紙作為襯墊,每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分;
可選用塑料洗滌瓶。

加酶反應

漏加

滴加后,認真檢查各孔

試劑保存

保存不規(guī)范

一定要在2-8存放。不得過高,也不得凍存(凍存后,酶液將失效)。

對照品

對照品為凍干品

按對照管標示,加入相應體積的去離子水或蒸餾水復溶,充分溶解混勻?砂凑f明書使用。


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