如今ELISA方法已被廣泛應(yīng)用于多種細菌和病毒等疾病的診斷。在動物檢疫方面,ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的標準方法。
1定義:用酶標記抗原或抗體檢測液體(血液、細胞液)中未知抗體或抗原的方法。
原理:
1、利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)將待測物與酶鏈接
2、通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定
測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
常用種類:
直接法(direct ELISA):將已知抗原直接吸附于載體,加酶標抗體。檢測抗體
間接法(indirect ELISA):將已知抗原吸附于固相載體,加酶標記二抗。檢測液相中未知抗體
雙抗體夾心法(Sandwich ELISA):將已知抗體吸附于固相載體,酶標記一抗。檢測液相的可溶性抗原
競爭法(Competitive ELISA):將已知抗體或抗原吸附于固體相載體,酶標記抗原或抗體。檢測液相中的可溶性抗原或抗體
阻斷法(Block ELISA)
將已知抗原吸附于固相載體,酶標記單克隆抗體。檢測液相中的可溶性抗體,
1、直接法測定抗原
A:將抗原吸附在載體表面
B:加酶標抗體,形成抗原—抗體復(fù)合物
C:加底物。底物的降解量=抗原量。
2、間接法測定抗體
A:將抗原吸附于固相載體表面
B:加抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物
C:加酶標抗體
D:加底物。測定底物的降解量=抗體量
3、雙抗體夾心法測定抗原
A:將抗體吸附于固相表面
B:加待檢抗原,形成抗原—抗體復(fù)合物
C:加酶標抗體
D:加底物。底物的降解量=抗原量
4、競爭法測定抗原
A:將抗體吸附在固相載體表面
B:同時加入酶標抗原待測抗原,競爭結(jié)合抗體;對照只加入酶標抗原
C:加底物。對照品與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量
5、阻斷法測定抗體
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測法。
A:將抗原吸附于在固相載體表面;
B:先加待檢血清(抗體),形成抗原-抗體復(fù)合物;
C:再加酶標單抗
D:加底物
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