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ELISA操作常見問題“加樣”的解決辦法
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就Elisa試劑盒中“加樣”操作過程中的問題為您具體分析。

步驟

可能原因

解決辦法

選材

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑（可以看下ELISA試劑盒選購經(jīng)驗總結(jié)篇），操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

加樣

1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；

2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；

3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。

1.標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2.加樣后及時放入孵箱。

3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5.標(biāo)本較多時，請分批操作。

在現(xiàn)在的ELISA試劑盒（yingzaituan.cn）中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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