酶聯(lián)免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點，但對實驗操作條件的要求比較嚴(yán)格。實驗條件主要由實驗室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對實驗室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴(yán)重一些。本人結(jié)合幾年的工作實踐介紹一下進(jìn)行ELISA操作的時候應(yīng)該注意的問題。
實驗技術(shù)之酶聯(lián)免疫試劑盒操作的通用的規(guī)則
1．1 要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20％左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0．2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其最高量程和最低量程進(jìn)行確定。
1．2 在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
1．3 吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
1．4 將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的最好的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
1．5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
1．6 液體全部加入酶標(biāo)孔后，最好將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
1．7 孵育時要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
1．8 實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
1．9 由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
1．10 手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
1．11 檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
1．12 底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃
1．13 孵育的時間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時間為準(zhǔn)。
1．14 要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
1．15 對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗證。
1．16 沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
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