1．甲醛 是常用的醛類(lèi)固定劑，甲醛(formaldehyde)通過(guò)與蛋白多肽鏈氨基酸側(cè)鏈的功能基團(tuán)，如氨基、羥基、酰氨基等結(jié)合，使蛋白多肽分子間形成亞甲基橋(-CH2 -)，蛋白質(zhì)不再發(fā)生改變，保存原位。其特點(diǎn)是組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好，穿透性強(qiáng)，組織收縮少。但是，醛基與抗原蛋白 氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的空間構(gòu)象發(fā)生改變，分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可能部分和完全遮蓋抗原決定簇，使之不能完全暴露，因此，在免疫組織化學(xué)染色時(shí)產(chǎn)生假陰性結(jié)果。如果固定后能夠充分水洗，可減少分子間交聯(lián)。在免疫組織化學(xué)染色之前切片通過(guò)抗原修復(fù)還可使抗原再現(xiàn)。為減少固定劑與抗原的交聯(lián)，在使用醛類(lèi)固定劑時(shí)，應(yīng)縮短固定時(shí)間(8～24小時(shí))，降低固定溫度(4℃)。由于上述缺點(diǎn)可以通過(guò)一定處理加以糾正，因此甲醛是首選固定劑。 (1)10％中性緩沖福爾馬林：商品試劑常為37％一40％甲醛水溶液，常按1：9比例使用，但甲醛的實(shí)際濃度為4％[配法：甲醛原液10ml，0．1mol／L磷酸緩沖液(PB，pH7．4)90ml混勻。
(2)4％多聚甲醛磷酸緩沖液(多聚甲醛40g，0．1mol／L PBS 500ml，兩者混合加熱至6℃，攪拌并滴加1N NaOH至清澈為止，冷卻后加PB至總量1000m1)。
2．丙酮 為無(wú)色極易揮發(fā)和易燃的液體，丙酮(acetone)滲透力很強(qiáng)，能使蛋白質(zhì)沉淀凝固，但不影響蛋白質(zhì)的功能基團(tuán)而保存酶的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果較好。缺點(diǎn)是固定快、滲透力強(qiáng)，易使組織細(xì)胞收縮，保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)欠佳。一般4℃下30～60分鐘為宜。
3．醇類(lèi) 性能與丙酮基本相同，有固定和脫水的雙重作用，穿透力快，組織塊收縮明顯，硬化力強(qiáng)。用冷液能較好地保存酶和抗原的免疫活性，但醇類(lèi)對(duì)低分子蛋白質(zhì)、多肽及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差。解決的辦法是與其他試劑混合使用。
4．混合固定劑
(1)Bouin液：先將飽和苦味酸750ml過(guò)濾，加入40％甲醛250ml，混合后存于4℃冰箱備用，臨用前加入冰醋酸50ml。組織通常在4℃下固定6～8小時(shí)。此固定劑對(duì)腎臟結(jié)構(gòu)保存不利。
(2)Zamboni液：稱(chēng)取多聚甲醛20g，加入飽和苦味酸150ml，加熱至60~C左右，持續(xù)攪拌，使之完全溶解。過(guò)濾、冷卻后加Karasson-Schwh磷酸緩沖液(NaH2 PO4 ・H2 O3．31g，Na2 HPO4 ・7H2 0 33．77g，加雙蒸水至1000m1)。該固定液可用于光鏡、電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)觀察。固定時(shí)間以6-18小時(shí)為宜。
(3)AAF液：為較常用的固定液(95％一100％乙醇85ml，冰醋酸5ml，濃甲醛l0ml)。
(4)Clarke改良固定劑(100％乙醇75ml，冰醋酸25m1)，常用于冰凍切片的后固定。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
