閱讀次數(shù)：1358 發(fā)布時間：2015/4/13 9:39:05
免疫組化染色的關(guān)鍵環(huán)節(jié)除了優(yōu)質(zhì)的抗體、敏感的檢測方法和熟練的組織制備技術(shù)，還需要具有很好的抗原的消化和修復(fù)技術(shù)，目前檢測石蠟切片的90%的抗體都是需要采用抗原消化或者抗原修復(fù)方法，才能夠獲得滿意的結(jié)果的。因為組織在制備過程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，熱作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，所以在石蠟、冰凍和塑料切片免疫組織化學(xué)（IHC）實驗過程中，可以采用胰蛋白酶消化、表面活性劑破膜、微波緩沖液和金屬鹽修復(fù)等方法，使被掩蓋的抗原決定簇或變性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢復(fù)，使原來認為不能在石蠟切片上進行IHC的許多抗體獲得良好的染色結(jié)果。
目前，抗原修復(fù)有許多種方法，有的是根據(jù)抗體的要求進行，有的是根據(jù)抗原的表達程度來進行，有的對每種病例每項檢測，都要求必須進行抗原修復(fù)，以達到抗原全面表達的最佳狀態(tài)。本手冊主要推薦采用常用的酶消化和微波熱修復(fù)的方法。
作為免疫組化實驗中最關(guān)鍵的一步，抗原修復(fù)的方法、溫度、修復(fù)時間、修復(fù)介質(zhì)都影響到實驗的結(jié)果。上海恒遠生物提供多種抗原修復(fù)試劑，供實驗者根據(jù)不同的抗原選擇不同的修復(fù)介質(zhì)修復(fù)以達到最佳的修復(fù)效果。
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片
1 抗原熱修復(fù)
A 高溫高壓熱修復(fù) 取一定量的 0.01M 檸檬酸鹽緩沖液 pH6.0 于壓力鍋中 大火加熱至沸騰 將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑料切片架上 放入已沸騰的緩沖液中 蓋上鍋蓋 扣上壓 力閥 繼續(xù)加熱至噴氣 從噴氣開始計時 1-2 分鐘后 壓力鍋離 開熱源 冷卻至室溫 取出玻片 先用蒸餾水洗兩次后用 PBS 洗5 分鐘
B 微波熱修復(fù) 取一定量的 0.01M 檸檬酸鹽緩沖液 pH6.0 于微波盒中 微波加熱至沸騰 將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑 料切片架上 放入已沸騰的緩沖液中 中高檔繼續(xù)處理 10-15 分 鐘 取出微波盒冷卻至室溫 取出玻片 先用蒸餾水洗兩次后用PBS 洗 5 分鐘
C 酶消化方法 常用 0.1%胰蛋白酶和 0.4%胃蛋白酶液 胰蛋白酶使用前預(yù)熱至 37 切片也預(yù)熱至 37 消化時間約為 5~30分鐘 胃蛋白酶消化 37 時間為 10-30 分鐘
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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