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技術(shù)服務(wù)專區(qū)
酶聯(lián)免疫(ELISA)代測(cè)服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的..
組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場(chǎng)力的作..
解決方案

2015最新ELISA方法測(cè)定拓展解說

閱讀次數(shù):2009    發(fā)布時(shí)間:2015/1/14 9:29:00

不知不覺新年的第一個(gè)月已經(jīng)過半到中旬,今天上午,我公司黨經(jīng)理接到實(shí)驗(yàn)技術(shù)部發(fā)來的2015最新ELISA方法測(cè)定拓展解說。
我公司具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺(tái),成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng),熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì),可以有效的保證公司產(chǎn)品的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。在最新ELISA方法測(cè)定拓展中,主要介紹了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定傷寒桿菌“O”抗體:
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體(或SPA)檢測(cè)未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高,特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法,間接法,雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹,酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下,見圖:
 
圖   ELISA-SPA法原理
1. 加抗原 使之吸附于固相載體(如塑料反應(yīng)板)
2. 洗滌 加待測(cè)血清
3. 洗滌 加酶標(biāo)記SpA
4. 洗滌 加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。
材料:
1. 聚乙烯塑料反應(yīng)板(PH9.6時(shí)可吸附蛋白Ag)
2. 抗原:傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原
3. 待測(cè)血清
4. 凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白(HRD—proteinA)純品
5. 鄰苯二胺(OPD)
6. 包被液:0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6
7. 稀釋液:10%免疫血清PBS—吐溫20,防止非特異性吸附
8. 洗滌液:0.02MTrisTWeen20 ,Ph7.4防止非特異性吸附
9. 底物溶液: 0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升
                       0.1M檸檬酸24.3毫升
                       蒸餾水50毫升
臨用前新鮮配制,在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺,然后加入30%雙氧水0.15毫升,底物對(duì)光敏感,需要避光并立即使用。
10. 終止液;2M硫酸。
方法:
1.抗原包被
取潔凈的聚苯乙烯微量反應(yīng)板,于每孔內(nèi)加傷寒抗原0.1毫升(用包被緩沖液稀釋,蛋白含量10微克/毫升),置37℃1小時(shí),棄抗原液,用洗滌液3次每次3分鐘。
2.加待測(cè)血清
于每孔內(nèi)分別加不同稀釋度(如1:5,1:10,1:20…1:80)的待測(cè)血清,PBS空白對(duì)照,陰性對(duì)照血清,陽性對(duì)照血清各0.1毫升。置37℃30分鐘,洗滌3次。
3.加酶聯(lián)A蛋白
于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升,置37℃20分鐘,洗滌3次。
4.加臨時(shí)配制的底物溶液各0.1毫升,置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應(yīng)。
5.結(jié)果判斷:(肉眼判斷)
若顏色于陰性對(duì)照相同則為陰性,若較陰性對(duì)照深則為陽性,根據(jù)顏色深淺以(+)表示。

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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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