閱讀次數(shù)：1853 發(fā)布時間：2015/1/6 9:13:50
我公司主要為您提供實驗室科研產(chǎn)品，其中主營產(chǎn)品酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA KIT)可提供免費代測服務(wù)。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體，那么酶聯(lián)免疫實驗代測原理主要有哪些呢？ 我們可以根據(jù)以下幾個方面來分析：
第一、實驗原理
應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中濃度。
在ELISA測定方法中，有這幾個必要試劑：
① 固相的抗菌素原或抗體，即免疫吸附劑。
② 酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為結(jié)合物。
③ 酶反應(yīng)的底物。
第二、定量測定
ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線最高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。
測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。
第三、酶聯(lián)免疫試劑盒的基本原理
1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水 性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué) 和酶學(xué)活性；
3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反 應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
酶聯(lián)免疫實驗代測原理中，還包括了其試劑盒產(chǎn)品的作用：
① 將酶催化反應(yīng)的放大作用和抗原抗體親和反應(yīng)的高度專一性、特異性相結(jié)合，以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑進行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。
② 實現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
③ 其抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
④ 為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置。
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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