閱讀次數(shù)：1862 發(fā)布時間：2014/12/24 8:48:28
前言：在酶聯(lián)免疫實驗中，樣本的處理是一個關鍵步驟。在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。針對酶聯(lián)免疫實驗樣本的處理方法，我公司技術做出了總結。那么液體樣本及常見樣本應當怎樣處理呢？且聽酶聯(lián)免疫學第三方檢測中心為您細細道來……
一、血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
二、血漿
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
三、尿液
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
四、細胞培養(yǎng)上清
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
五、培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
六、組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本融化后仍然保�?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
七、牛奶樣本的處理方法
方法一：取10ml牛奶放入離心管，加入10ml乙酸乙酯，超聲震蕩30min，然后4000g離心10min(如兩相之間出現(xiàn)乳化層，則將樣品瓶放在80℃的水浴中約5min，再離心)移取1ml乙酸乙酯層至另外試管中，60℃氮氣流下蒸干，殘留物用緩沖液2ml緩沖后備用，前處理過程約需2小時。
方法二：取10ml牛奶10℃3500G離心10MIN，祛除上層脂肪，取5ml脫脂奶粉加入150微升17.2%亞鐵氰化鉀，出現(xiàn)沉淀，漩渦混合，然后加入150微升53.5%硫酸鋅。再次漩渦混合。15攝氏度3500g離心10分鐘，取上層清液用緩沖液1：2稀釋待用，前處理過程所需1小時。
八、糞便樣本的處理方法
對于糞便樣本的處理，一般要求采集干的糞便，稀的糞便不利于檢測(對樣本處理帶來難度，也會使準確性降低)。
糞便樣本處理如下：
① 收集：直接用醫(yī)院臨床收集糞便的耗材進行收集；
② 采樣：一般選取的重量不能低于50mg，以1g為基準。稱取1g加9ml的PBS(磷酸鹽緩沖液，PH控制在7.2-7.4，濃度為0.01mol/L)換算成勻漿的比例就是10%；
③ 保存：勻漿后的樣本如果采樣周期在1周之內，可以保存在2-8℃，如果取樣周期在一個禮拜以上一個月以內，-20℃保存。如果取樣周期超過1個月，保存在-80冰箱！低溫保存的話，盡量避免反復凍融。
九、植物組織樣本的處理方法
植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織，都應該采用鮮重的計重方式，一般要遵循以下原則：
① 稱取的組織重量不能低于50mg。
② 勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)
③ 組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應該分2次加進去，這樣勻漿更充分。
④ 充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉數(shù)選取2000-3000轉每分，轉數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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